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【產品名稱】

通用名稱：犬細小病毒(CPV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

Name：Canine Parvovirus Detection Kit（Real-Time PCR Method）

【包裝規(guī)格】10T/盒       

【預期用途】

犬細小病毒（Canine Parvovirus, CPV）可引起犬的劇烈嘔吐、出血性腸炎、脫水、白細胞減少和心肌炎等癥狀。臨床上犬細小病毒病可分為腸炎型和心肌炎型，對犬造成很大危害。CPV有3種亞型，主要是在VP2蛋白上有基因差異，即CPV-2a、CPV-2b、CPV-2c^[1]。感染CPV的犬主要通過糞便向外排毒，因此糞便是犬間傳遞感染的主要傳染源。CPV常規(guī)檢測方法主要有病毒分離鑒定、血凝和血凝抑制試驗、ELISA和PCR等方法。PCR法靈敏度高、特異性強、操作簡單，已被廣泛用于CPV診斷[^2-3]。

本試劑盒適用于檢測樣本中的犬細小病毒，用于犬細小病毒感染的輔助診斷。

【檢驗原理】

本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術，設計一對犬細小病毒特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光PCR技術對犬細小病毒的DNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

【試劑組成】

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融次數不超過5次，有效期12個月。

【適用儀器】ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測儀。

【標本采集】病死犬可采集淋巴結、脾、肺、等組織；活犬可采集血液、血清、糞便等。

【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

組織樣品：每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g，手術剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨，加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉至1.5mL滅菌離心管中，8000rpm離心2min，取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中；咽拭子樣品直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產的核酸提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書進行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據待檢測樣本總數，設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照；樣品每滿10份，多配制1份)，每測試反應體系配制如下表：

將混合好的測試反應液分裝到PCR反應管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟1提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取4μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內；

4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光，選擇None即可。

4.3 推薦循環(huán)參數設置：

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。

【參考文獻】

[1] Wang S J, Yang S T, Cheng C F, et al. Isolation and identification of canine parvovirus and sequence analysis of its VP2 gene [J]. Progress in Modern Biomedicine, 2009, 10, 26.

[2]李英俊, 史利軍, 李剛, 等. 犬細小病毒熒光定量PCR檢測方法的建立與評價[J]. 中國獸醫(yī)學報, 2010, 30(12): 1594-1597.

[3]劉海防, 胡傳偉, 謝之景, 等. 犬細小病毒Taqman熒光定量PCR檢測方法的建立[J]. 中國獸醫(yī)學報, 2010, 29(1): 36-40

[4]國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局. GB/T 27533-2011 犬細小診斷技術[S].

【生產企業(yè)】

企業(yè)名稱：廣州維伯鑫生物科技股份有限公司 郵 編：510663

生產地址：廣州高新技術產業(yè)開發(fā)區(qū)科學城科豐路31號G11棟201號

電子郵箱：info@vipotion.com 電 話：020-66377266

公司網址：http:// 傳 真：020-66377267