【產(chǎn)品名稱】
通用名稱:犬瘟熱病毒(CDV)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)
Name:Canine Distemper Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】10T/盒
【預(yù)期用途】
犬瘟熱是由犬瘟熱病毒(Canine Distemper Virus, CDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病。該病廣泛分布于世界各地,是當(dāng)前危害犬群最嚴(yán)重的疫病之一,對(duì)其它犬科動(dòng)物、鼬科動(dòng)物和貓科動(dòng)物也具有較大危害。CDV感染臨床癥狀,根據(jù)病毒種屬、環(huán)境因素以及個(gè)體對(duì)感染的反應(yīng)不同而輕重不同。臨床癥狀主要局限于上呼吸道,所以咳嗽、流鼻涕會(huì)很明顯。未經(jīng)免疫的幼犬很可能出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀,如肺炎、腹瀉、脫水、厭食等[1]。犬瘟熱的傳染性極強(qiáng),且發(fā)病率高,常常可引起大批量的犬、貂、狐及部分野生動(dòng)物發(fā)病,致死率可達(dá)30%-80%,給毛皮動(dòng)物產(chǎn)業(yè)和野生動(dòng)物保護(hù)業(yè)造成了重大經(jīng)濟(jì)損失。目前,本病缺乏特效的治療方法,早期診斷及早使用抗血清是治療該病的重要措施。
本試劑盒適用于檢測(cè)的犬肝、脾、肺等組織、血液、血清、淚液、鼻液、唾液、糞便。等標(biāo)本中犬瘟熱病毒RNA,適用于犬瘟熱病毒感染的輔助診斷。其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用TaqMan探針法實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),設(shè)計(jì)一對(duì)犬瘟熱病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對(duì)犬瘟熱病毒的RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。
【試劑組成】
包裝規(guī)格 |
25T/盒 |
50T/盒 |
CDV反應(yīng)液 |
500μL×1管 |
500μL×2管 |
酶液 |
25μL×1管 |
50μL×1管 |
CDV陽(yáng)性質(zhì)控品 |
50μL ×1管 |
50μL ×1管 |
陰性質(zhì)控品 |
250μL ×1管 |
250μL ×1管 |
說(shuō)明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。
【儲(chǔ)存條件及有效期】-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過(guò)5次,有效期12個(gè)月。
【適用儀器】ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測(cè)儀。
【標(biāo)本采集】病死犬可采集肝、脾、肺、等組織;活犬可采集血液、血清、淚液、鼻液、唾液、糞便。
【保存和運(yùn)輸】
上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過(guò)6個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。
【使用方法】
1. 樣品處理(樣本處理區(qū))
1.1 樣本前處理
組織樣品:每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中;咽拭子樣品直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中。
1.2 核酸提取
推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進(jìn)行核酸提取,請(qǐng)按照試劑說(shuō)明書進(jìn)行操作。
2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))
根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿10份,多配制1份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 |
CDV反應(yīng)液 |
酶液 |
用量(樣本數(shù)為N) |
20μL |
1μL |
將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中,21uL/管。
3. 加樣(樣本處理區(qū))
將步驟1提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
4. PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))
4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi);
4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25μL;
熒光通道選擇: 檢測(cè)通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光,選擇None即可。
4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:
步驟 |
循環(huán)數(shù) |
溫度 |
時(shí)間 |
收集熒光信號(hào) |
1 |
1 cycle |
42℃ |
20min |
否 |
2 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
3 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
55℃ |
30sec |
是 |
【注意事項(xiàng)】
1.所有操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行;
2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,完全混勻并短暫離心;
3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
7.實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;
8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。
【參考文獻(xiàn)】
[1] 劉雯, 夏志平, 靳朝. 犬瘟熱研究進(jìn)展[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2010, 31(8): 83-87.
[2] 國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局. GB/T 27532-2011 犬瘟熱診斷技術(shù)[S].
【生產(chǎn)企業(yè)】
企業(yè)名稱:廣州維伯鑫生物科技股份有限公司 郵 編:510663
生產(chǎn)地址:廣州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學(xué)城科豐路31號(hào)G11棟201號(hào)
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