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貓傳染性腹膜炎(FIP)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

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【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:貓傳染性腹膜炎(FIP)核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

Name:Feline Infectious Peritonitis Viruses Detection Kit(Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】10T/盒                                                             

【預(yù)期用途】

本試劑盒適用于檢測(cè)貓科動(dòng)物的鼻拭子、咽拭子、糞便標(biāo)本或血清等樣本中的貓傳染性腹膜炎病毒,用于貓傳染性腹膜炎病毒感染的輔助診斷,其檢測(cè)結(jié)果僅供參考。

 

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用TaqMan探針法實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù),設(shè)計(jì)一對(duì)貓傳染性腹膜炎病毒特異性引物,結(jié)合一條特異性探針,用熒光PCR技術(shù)對(duì)貓傳染性腹膜炎病毒的RNA進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè),用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

 

【試劑組成】

包裝規(guī)格

25T/盒

50T/盒

FIP反應(yīng)液

     500μL×1管

     500μL×2管

酶液

       25μL×1管

       50μL×1管

FIP陽(yáng)性質(zhì)控品

      50μL ×1管

      50μL ×1管

陰性質(zhì)控品

     250μL ×1管

     250μL ×1管

 

說明:不同批號(hào)的試劑盒組分不可交互使用。

 

【儲(chǔ)存條件及有效期】-20℃±5℃,避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過5次,有效期12個(gè)月。

 

適用儀器ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測(cè)儀。

 

【標(biāo)本采集】

鼻拭子:將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處,停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入2-4ml生理鹽水中,尾部棄去。

咽拭子: 用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁,同樣將棉簽頭浸入2-4 ml生理鹽水中,尾部棄去。

血液或血清樣品:使用無(wú)菌注射液抽取樣品置于離心管中待檢。

糞便:取糞便置入無(wú)菌管中,密閉送檢。

 

【保存和運(yùn)輸】

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長(zhǎng)期保存可置-70℃,但不能超過6個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用2~8℃冰袋運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

 

使用方法

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

組織樣品:每份組織分別從3個(gè)不同的位置稱取樣品約1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中;咽拭子樣品直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產(chǎn)的核酸提取或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進(jìn)行核酸提取,請(qǐng)按照試劑說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測(cè)樣本總數(shù),設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照;樣品每滿10份,多配制1份),每測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:

試劑

FIP反應(yīng)液

酶液

用量(樣本數(shù)為N)

20μL

1μL

 

將混合好的測(cè)試反應(yīng)液分裝到PCR反應(yīng)管中,21uL/管。

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟1提取的核酸、陽(yáng)性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取4μL,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))

4.1 將待檢測(cè)反應(yīng)管置于熒光定量PCR儀反應(yīng)槽內(nèi);

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為25μL;

熒光通道選擇: 檢測(cè)通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列儀器請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光,選擇None即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置:

步驟

循環(huán)數(shù)

溫度

時(shí)間

收集熒光信號(hào)

1

1 cycle

42℃

20min

2

1 cycle

95℃

10min

3

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

 

 

注意事項(xiàng)

1.所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行;

2.試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,完全混勻并短暫離心;

3.反應(yīng)液應(yīng)避光保存;

4.反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;

7.實(shí)驗(yàn)完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;

8.試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待,并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

 

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱:廣州維伯鑫生物科技股份有限公司 郵 編:510663

生產(chǎn)地址:廣州高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)科學(xué)城科豐路31號(hào)G11棟201號(hào)

電子郵箱:info@vipotion.com 電 話:020-66377266

公司網(wǎng)址:http:// 傳 真:020-66377267


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